微生物无痕敲除技术介绍

有痕敲除&无痕敲除


基因敲除是一种常见的生物工程技术,可用于靶向基因组改造。有痕敲除的含义是每次敲除基因后都会在基因组中引入一个筛选标记。一方面,当进行连续敲除时,多种抗性标记在同一株菌体中堆叠,使得后面抗体标记的选择越来越困难。另一方面,抗体基因的插入可能会影响上下游基因的表达。因此,无痕(markerless/scarless)敲除越来越受到追捧,成为人们研究的重点。

无痕敲除技术


1

同源重组

同源重组技术包括Rec A和Red重组系统,Red系统具有明显的优势,包括同源臂较短,重组率较高等,被广泛用于大肠杆菌的基因组编辑。然后Red系统存在外源片段残留的情况,比如残留一个FRT重组酶作用位点。研究人员通过持续的研究,对该系统进行了持续的优化和改进,并开发出了无痕敲除技术,方便进行连续多个基因的敲除操作。下面我们将对这些优化策略进行解读。

1.1 环状质粒型同源重组载体

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